很多人想知道环境中微生物的检测和分离纯化，今天微生物检测中心就为大家分享，供大家参考。

    一、实验目的

    1、熟悉常用微生物培养基的配制方法。

    2、学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。

    3、用平板划线法和稀释法分离微生物。

    4、认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。

    二、实验原理

    1、微生物的分离与纯化

    土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此，土壤是微生物多样性的重要插所，也是发掘微生物资源的重要基地，可以从土壤中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

    从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对雪养、酸碱度、浓度和氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某些抑制剂抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物。再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直至得到纯菌株。

    2、平板菌落计数法

    平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。

    平板菌落计数法虽然操作繁琐，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。

    三、实验材料

    土样10g,未知菌变形杆菌单菌落平板和无菌水。取液器（5m1、l000ml各一支），培养箱，培养皿（20个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，5ml、1ml无菌吸头（移液管），记号笔，酒精灯，火柴，试管架，牙签。

    四、实验步骤

    （一）培养基的制备（提前准备）

    按以下步骤制备牛肉膏蛋白胨平板培养基，每组20个平板。

    1、培养基的制备原则：适当的营养成分；合适的酸碱度，配制后经灭菌手续方可使用。

    2、培养基配制的基本程序：称量一溶化一测定及矫正pH一过滤一分装-灭菌备用（若配制固体平板培养基，则先灭菌后再倾倒平板备用）。

    3、培养基制备过程

    （1）称量：按配方及配制的总量计算各种成分所需的量分别称取。

    （2）溶解：将各种成分放入三角瓶（三角瓶体积要大于所装培养基体积2倍为宜）中，加自来水（一般配完全培养基用）或蒸馏水至所配培养基的总量，在微波炉中加热溶解，观察液体沸腾情况，在液体溢出之前，马上断开电源，反复多次，直到完全溶解。

    （3）调pH值：初溶解好的培养基pH可能不符合要求，需用lmol/L NaOH或lmol/LHCI调pH至所需范围，

    （4）过滤：趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于结果观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。

    （5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。

    微生物检测中心跟大家分享以上内容，希望可以帮助到大家。